常用免疫組織化學(xué)方法的原理

常用免疫組織化學(xué)方法的原理：

1. 免疫熒光細(xì)胞化學(xué)技術(shù)：將已知抗體標(biāo)上熒光素,以此作為探針檢查細(xì)胞或組織內(nèi)的相應(yīng)抗原,在熒光顯微鏡下觀察.當(dāng)抗原抗體復(fù)合物中的熒光素受激發(fā)光的照射后會(huì)發(fā)出一定波長(zhǎng)的熒光,從而可以確定組織中的抗原定位或定量。

2. 免疫酶細(xì)胞化學(xué)技術(shù)：是目前免疫組織化學(xué)研究中zui常用的技術(shù)．基本原理是先以酶標(biāo)記的抗體與組織或細(xì)胞作用，然后加入酶的底物，生成有色的不溶性產(chǎn)物或具有一定電子密度的顆粒，通過(guò)光鏡或電鏡，對(duì)細(xì)胞或組織內(nèi)的相應(yīng)抗原進(jìn)行定位或定性研究。

3. 免疫膠體金技術(shù)：就是用膠體金標(biāo)記一抗，二抗或其他的能特異性的結(jié)合免疫球蛋白的分子（如葡萄球菌A蛋白）等作為探針對(duì)組織或細(xì)胞內(nèi)的抗原進(jìn)行定性，定位或定量研究．由于膠體金的電子密度高，多用于免疫電鏡的單標(biāo)記或多標(biāo)記的定位研究。

抗體修復(fù)方式:

修復(fù)液：0.01M 枸櫞酸（pH6.0）或者0.05M EDTA（pH8.0）

抗體修復(fù)方法：

方法1：沸水浴修復(fù)，將盛有修復(fù)液和玻片的燒杯置于沸水浴環(huán)境，保持外部沸騰狀態(tài)15min，自然冷卻至室溫；

方法2：微波修復(fù)，將盛有修復(fù)液和玻片的燒杯置于微波爐中，高火5min，停火3min，中火5min，自然冷卻至室溫。

抗體溶解方法：方法1：我們的抗體（凍干粉）已經(jīng)包含了0.01M PBS、1% BSA和0.1% 防腐劑（疊氮鈉或慶大霉素），您只需要加入滅菌的雙蒸水就行了。抗體溶解后，置于-20℃保存，可以分裝后使用，避免反復(fù)凍融，可保證至少1年有效；

方法2：也可以只加入一半體積的雙蒸水，再用一半體積的甘油補(bǔ)足，置于-20℃保存，這樣抗體不會(huì)凍，有利于抗體的穩(wěn)定。

后續(xù)試驗(yàn)時(shí)，再使用對(duì)應(yīng)的緩沖液稀釋成工作液，即用即配。