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無菌單料乳糖膽鹽發酵管培養基的配制

發表時間:2020-11-26 16:25

無菌單料乳糖膽鹽發酵管培養基的配制:


1)、Camp-BAP固體培養基的配制:

稱取8.92g培養基,溶于200ml蒸餾水中高壓滅菌,待冷卻至55°C左右加入200ul添加劑A、200ul添加劑B和10ml脫纖維裂解羊血,充分搖勻后倒平板。(添加劑A和B為購買附帶)。

2)、Skirrow固體培養基的配制:

稱取8.5g培養基,溶于200ml蒸餾水中高壓滅菌,待冷卻至55°C左右加入2ml FBP原液和10ml脫纖維裂解羊血,充分搖勻后倒平板。

FBP原液配置:

分別稱取0.5g焦亞硫酸鈉、0.5g丙酮酸鈉和0.5g硫酸亞鐵,溶于20ml蒸餾水中,濾膜過濾除菌,放置4°C冰箱可保存一周。

3)、布氏肉湯增菌液的配制:

稱取28.1g布氏肉湯粉末,溶解于1000ml蒸餾水中高壓滅菌,冷卻后備用。


2、增菌培養

寬鱗大孔菌將新鮮食品,如雞肉,減碎,取5g置于50ml離心管中,加入布氏肉湯至液面覆蓋雞肉樣品,擰緊離心管,先在37°C下預增菌4小時,在加入100 ul頭孢哌酮(30mg/ml),并顛倒混勻,放置在微需氧培養箱中42°C培養48小時。


3、分離純化


用接種環沾取增菌液劃線于Skirrow血平板上,在平板上挑取不溶血、灰色、有光澤、且邊緣整齊發亮的菌落在Camp-BAP平板上純化,挑取扁平、灰色、像水滴樣菌落多次純化后保存。


4、菌株培養


將純化的彎曲桿菌單菌落接種到Skirrow血平板上,放置在42°C的微需氧環境下培養48小時,觀察細菌生長狀態。微需氧條件的創造可用微需氧產氣袋和密閉培養罐,也可以用微需氧培養箱(三氣培養箱)培養。


5、菌株保存方法


挑取單克隆菌株在Skirrow固體培養基上平板劃線,放置在42°C的微需氧環境下培養48小時,用滅菌棉簽從平板上刮下長出的菌落,懸浮在50%甘油的布氏肉湯保種液中,置于-80°C超低溫保存。在-20°C冰箱中保存效果較差,存放一周后細菌復蘇率即顯著下降。此外,保存菌株需要每隔一年重新活化保存一次。


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