從熒光的發(fā)光原理開(kāi)始，簡(jiǎn)單介紹免疫熒光（IF）應(yīng)用

　　熒光分子可以說(shuō)是生物學(xué)研究中最經(jīng)常使用的標(biāo)記分子，它們作為探針標(biāo)記目標(biāo)分子，可用于監(jiān)測(cè)其表達(dá)量及示蹤。它們相對(duì)于放射性同位素更加安全和環(huán)保，相對(duì)于不發(fā)光的標(biāo)記物如HRP或金屬顆粒等更加靈敏。因而應(yīng)用非常廣泛。下面我們將從熒光的發(fā)光原理開(kāi)始，簡(jiǎn)單介紹免疫熒光（IF）應(yīng)用。

光相關(guān)知識(shí)點(diǎn)

　　光是一種可見(jiàn)的電磁波，是能量的輻射形式。光的波長(zhǎng)越長(zhǎng)，光子的能量越小。

　　光進(jìn)入某物質(zhì)后，部分或全部的光能可被物質(zhì)的分子或原子所吸收。光的吸收具有選擇性，一定能量的光量子輻射只能被一定結(jié)構(gòu)的物質(zhì)吸收。

熒光物質(zhì)知識(shí)點(diǎn)

　　熒光的基礎(chǔ)知識(shí)：熒光是物質(zhì)中的電子吸收光的能量由低能狀態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)楦吣軤顟B(tài)，再回到低能狀態(tài)時(shí)釋放出的光。

　　熒光物質(zhì)的種類：芳香族及雜環(huán)化合物、熒光蛋白、納米顆粒（量子點(diǎn)）。

　　熒光物質(zhì)發(fā)光原理：光照射到某些原子時(shí)，光的能量使原子核周圍的一些電子由原來(lái)的軌道躍遷到了能量更高的軌道，即從基態(tài)躍遷到**激發(fā)單線態(tài)或第二激發(fā)單線態(tài)等。**激發(fā)單線態(tài)或第二激發(fā)單線態(tài)等是不穩(wěn)定的，瞬間將恢復(fù)基態(tài)，當(dāng)電子由**激發(fā)單線態(tài)恢復(fù)到基態(tài)時(shí)，能量會(huì)以光的形式釋放，產(chǎn)生熒光。

　　每一種熒光物質(zhì)都有其特定的激發(fā)光譜（Excitation）和發(fā)射光譜（Emission）。通常以相對(duì)強(qiáng)度為縱軸，以波長(zhǎng)為橫軸，這些吸收光譜和發(fā)射光譜有很好的對(duì)應(yīng)關(guān)系。激發(fā)光譜是固定發(fā)射光的波長(zhǎng)，測(cè)量激發(fā)光的波長(zhǎng)（有時(shí)候也測(cè)波數(shù)或者頻率等）與熒光強(qiáng)度之間的關(guān)系；發(fā)射光譜是固定激發(fā)波的波長(zhǎng)，測(cè)定發(fā)射光強(qiáng)度與波長(zhǎng)的關(guān)系。熒光物質(zhì)的發(fā)射波長(zhǎng)總是大于其激發(fā)波長(zhǎng)。

熒光標(biāo)記的應(yīng)用

　　熒光標(biāo)記幾乎可以用于所有生物學(xué)檢測(cè)，作為蛋白或抗體標(biāo)記物可用于ELISA、IF、FCM、WB，蛋白芯片、及活體成像等，作為核酸標(biāo)記物可用于FISH、基因芯片、qRT-PCR等。熒光標(biāo)記幾乎可以用于從宏觀的活體研究到微觀的組織、細(xì)胞、分子，甚至分子內(nèi)、分子間作用的所有生物學(xué)研究領(lǐng)域。

　　熒光標(biāo)記最常見(jiàn)的生物學(xué)應(yīng)用是免疫熒光（IF）和流式細(xì)胞術(shù)（FCM）。在免疫熒光中，最常用的是靶點(diǎn)胞內(nèi)定位、示蹤及活體分子成像等。