土壤堿性磷酸酶（S-AKP/ALP）洗滌方法

土壤堿性磷酸酶（S-AKP/ALP）洗滌方法：

1. 自動洗板機：每孔加入洗滌液350μl，注入與吸出間隔60秒。洗板5次。

2. 手工洗板：甩盡孔內液體，在潔凈的吸水紙上拍干，每孔加洗滌液350μl，浸泡1-2分鐘，吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標板內的液體，在厚的吸水紙上拍干。洗板5次。

實驗開始前，各試劑均應平衡至室溫；試劑或樣品配制時，均需充分混勻，并盡量避免起泡。

1.加樣：分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，余孔分別加標準品或待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣時將樣品加于酶標板底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。給酶標板覆膜，37℃孵育2小時。為保證實驗結果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。

2.棄去液體，甩干，每個孔中加入Detection Ab工作液 100μl(在使用前15分鐘內配制)，酶標板加上覆膜，37℃溫育1小時。

3.棄去孔內液體，甩干，洗板 3次，每次浸泡1-2分鐘，大約350μl /每孔，甩干并在吸水紙上輕拍將孔內液體拍干。

4.每孔加HRP Conjugate工作液(臨用前15分鐘內配制)100μl，加上覆膜，37℃溫育1小時。

5.棄去孔內液體，甩干，洗板5次，方法同步驟3。

6.每孔加底物溶液100μl，酶標板加上覆膜37℃避光孵育15分鐘左右(根據實際顯色情況酌情縮短或延長，但不可超過30分鐘。當標準孔出現明顯梯度時，即可終止)。

7.每孔加終止液50μl，終止反應，此時藍色立轉黃色。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。

8.立即用酶標儀在450nm波長測量各孔的光密度(OD值)。應提前打開酶標儀電源，預熱儀器，設置好檢測程序。

9.實驗完畢后將未用完的試劑按規定的保存溫度放回冰箱保存至有效期結束。

磷酸化表皮生長因子受體抗體

磷酸化轉錄接頭蛋白EP300抗體

磷酸化細胞轉錄因子ELK1抗體

磷酸化細胞轉錄因子ELK1抗體

磷酸化雌激素受體α抗體

磷酸化真核翻譯起始因子4B抗體

真核翻譯起始因子4B抗體

磷酸化轉錄接頭蛋白EP300抗體

磷酸化上皮細胞癌轉化蛋白2抗體

磷酸化真核翻譯起始因子4G抗體

表皮生長因子受體5抗體

電子轉移黃素蛋白β肽/黃素蛋白抗體

鈉通道蛋白α ENaC

轉錄因子E2F8抗體

內皮單核細胞激活肽2抗體

細胞外基質蛋白2抗體

上皮細胞膜蛋白3抗體

膜蛋白EVC2抗體

哺乳動物室管膜相關蛋白1抗體

內皮細胞粘附分子抗體

上皮細胞有絲分裂蛋白抗體